Le post-doctorant participera au projet collaboratif de l’ANR « FLIPPER », dont un des objectifs vise à reconstituer in vitro la machinerie responsable du transport actif des phospholipides, transport qui, dans les cellules, permet le maintien de la distribution asymétrique des phospholipides sur les deux feuillets des membranes. Les protéines principales impliqués dans le transport actif des lipides sont les flippases, incluant le complexe Drs2-Cdc50. Il a été montré que la petite protéine G Arl1 interagissait avec l’extrémité N-terminale de Drs2 et que la protéine Gea2 interagissait avec l’extrémité C-terminale de Drs2 et que ces deux protéines stimulaient le transport de lipides in vivo. La personne recrutée devra examiner in vitro, après reconstitution du complexe Drs2-Cdc50 en système lipidique modèle, le potentiel des protéines Arl1 et Gea2 à activer le transport de lipides par Drs2-Cdc50. Elle participera également à la production d’un complexe incluant les protéines Gea2, Arl1 et Drs2-Cdc50 pour son étude structurale ultérieure par cryo-microscopie électronique. Le projet FLIPPER rassemble des équipes de l’Institut de Génomique Fonctionnelle (IGF), Montpellier, de l’Université d’Aarhus (Danemark), et de l’Institut de Biologie Intégrative de la Cellule (I2BC), Gif-sur-Yvette.
Activités principales :
- Surexpression chez S. cerevisiae et purification (chromatographie d’affinité, chromatographie d’exclusion stérique) du complexe Drs2-Cdc50 et de la protéine Gea2.
- Surexpression chez E. coli et purification (chromatographie d’affinité, chromatographie d’exclusion stérique) de la protéine Arl1.
- Tests d’activité des protéines purifiées : mesure de l’hydrolyse de l’ATP par Drs2-Cdc50 par dosage spectrophotométrique, mesure de la capacité d’échange de nucléotide par la protéine Gea2 par un test basé sur la fluorescence intrinsèque de Gea2.
- Reconstitution du complexe Drs2-Cdc50 dans des protéoliposomes.
- Mesure de l’activité de transport de lipides par Drs2-Cdc50 par utilisation de lipides fluorescents.
- Détermination de l’influence de Gea2 et Arl1 sur le transfert de phospholipides catalysé par Drs2-Cdc50.
- Reconstitution du complexe Drs2-Cdc50-Gea2-Arl1 en nanodisques, pour son étude par cryo-microscopie électronique.
- Réunions régulières d’avancement avec les membres de l’équipe, du département et les membres du consortium FLIPPER.
Le candidat retenu est titulaire d'un doctorat en biochimie ou en biophysique.
Compétences techniques indispensables :
- Biochimie, biologie moléculaire (clonage, mutagenèse dirigée)
Compétences techniques souhaitées :
- Expression et purification de protéines membranaires, utilisation de détergents pour la solubilisation des protéines membranaires, reconstitution en protéoliposomes.
Le candidat retenu devra faire preuve d’un excellent esprit de collaboration, être motivé et ambitieux, et être capable de prendre des initiatives et d’assumer des responsabilités au sein de son environnement de travail.
La personne recrutée travaillera au sein de l’équipe Protéines et Systèmes Membranaires (LPSM) de l’I2BC. Le LPSM s’intéresse aux mécanismes moléculaires qui sous-tendent le transport de molécules ou d’ions à travers les membranes cellulaires, par des approches biochimiques, biophysiques et de dynamique moléculaire. Plus spécifiquement, nous étudions la machinerie protéique responsable du maintien de la répartition asymétrique des lipides dans les membranes cellulaires. Le LPSM fait partie de l’Institut de Biologie Intégrative de la Cellule (I2BC), Institut interdisciplinaire organisé en 5 départements scientifiques, ~60 équipes de recherche et 15 plateformes technologiques de haut niveau. L’I2BC est localisé à Gif-sur-Yvette, ~25 km au sud-ouest de Paris, au cœur de l’Université Paris-Saclay. La thèse sera financée dans le cadre d’un contrat obtenu auprès de l’Agence Nationale pour la Recherche (ANR).
Des contraintes de protocoles peuvent exiger de venir en dehors des plages horaires de travail habituelles (7h-19h), en soirée ou le week-end.
Entre 3131,00 € et 4341,00 € bruts mensuels selon expérience
44 jours
Pratique et indemnisation du TT
Prise en charge à 75% du coût et forfait mobilité durable jusqu’à 300€
Référence de l’offre
UMR9198-GUILEN-007
Section(s) CN / Domaine de recherche
Biologie moléculaire et structurale, biochimie
Expérience souhaitée
1 à 4 années
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